Манько В.М., Девришов Д.А. Фундаментальные основы. Ветеринарная иммунология

Иммунология — наука об иммунитете. Она изучает проявление, механизмы и способы управления иммунитетом, а также разрабатывает иммунологические методы диагностики, лечения и профилактики болезней человека и животных.

Принято считать, что начало новой науке положили знаменитые опыты английского врача Э. Дженнера (1749—1823). Он заметил, что во время эпидемий человеческой оспы чаще всего не заболевают доярки. Как известно, коровы болеют оспой с поражением кожи, особенно кожи вымени и сосков, где развиваются оспенные пустулы. У доярок, заразившихся от больных оспой коров, пустулы образуются на руках. Наблюдая эти явления, Дженнер пришел к выводу, что после заражения и переболевания доярок коровьей оспой они становятся невосприимчивыми к заражению человеческой оспой. В подтверждение своих наблюдений в мае 1796 г. он привил 8-летнему мальчику сначала коровью оспу, а спустя 1,5 мес оспу человека, и мальчик не заболел. Однако Дженнер не увидел в открытом им способе борьбы с оспой принципа предохранения от других инфекционных болезней. Его открытие дало человечеству лишь способ предупреждения оспы.

Основоположником современной научной иммунологии признан Луи Пастер. В 1881 г. он сообщил, что куры при заражении ослабленным возбудителем холеры кур становятся невосприимчивыми к заражению вирулентными культурами. Сопоставив свои опыты с наблюдениями Дженнера, Пастер сформулировал основной принцип защиты от возбудителя любой инфекционной болезни, который состоит в том, что организм после встречи с ослабленным возбудителем становится невосприимчивым (иммунным) к вирулентным микробам того же вида. Пастер в честь первооткрывателя предохранительных прививок против оспы Дженнера назвал ослабленные культуры возбудителей болезней вакцинами (от лат. vacca — корова). В последующие годы Пастер изготовил вакцины и при иммунизации животных установил наличие иммунитета против таких болезней, как сибирская язва, бешенство, рожа свиней и др. В дальнейшем было установлено, что иммунитет можно создать при вакцинации убитыми микроорганизмами, а также токсинами, выделяемыми микроорганизмами.

К концу XIX и в начале XX столетия были сделаны многие открытия, создавшие научный фундамент иммунологии. В 1883 г. И. Мечников открыл фагоцитоз и ввел понятие «клеточный иммунитет». В эти годы развивалась и гуморальная теория иммунитета, сторонником которой был П. Эрлих. Длительная полемика между сторонниками клеточной и гуморальной теорий иммунитета способствовала формированию иммунологии как науки. В 1908 г, Мечникову и Эрлиху была присуждена Нобелевская премия за выдающиеся открытия по иммунитету. В 1891 г. Э. Беринг и Ш. Китазато впервые применили пассивную иммунизацию против дифтерии и столбняка; в 1900 г. К. Ландштайнер открыл группы крови (А, В, О) у человека; в 1902 г. Ш. Рише установил феномен анафилаксии; в 1905 г. К. Пирке ввел понятие «аллергия»; в 1953 г. П. Медовар и М. Гашек независимо друг от друга открыли феномен иммунологической толерантности; в 1958 г. Ф. Бернет предложил клонально-селекционную теорию иммунитета; в 1959 г. Ж. Доссс с сотр. открыли систему антигенов гистосов мести мости человека; в 1962 г. Ж, Миллер установил роль тимуса как первичного лимфоидного органа; в 1963 г. Б. Бенацерраф установил гены иммунореактивности, получивших название Ir-генов; в N975 г. Ц. Мильстайн и Д. Кехлер предложили методику получения моноклональных антител. Крупнейшим обобщением последних лет явилось выделение двух независимых, но совместно функционирующих клеточных популяций в иммунном ответе Т- и В-лимфоцитов.

В результате новых открытий и достижений иммунология выросла в самостоятельную научную дисциплину, охватывающую круг проблем современной биологии, медицины и ветеринарии. К числу направлений общей иммунологии относят молекулярную иммунологию, иммуноморфологию, иммуногенетику, иммунохимию, эволюционную иммунологию, а к числу направлений частной иммунологии — иммунопрофилактику инфекционных болезней, клиническую иммунологию, иммунологию репродукции и эмбриогенеза, иммунопатологию, иммуноонкологию, трансплантационную иммунологию.

Ветеринарная иммунология также развивается по всем ведущим направлениям иммунологии в целом. Особое внимание иммунологии уделяют изучению особенности иммунитета у сельскохозяйственных животных и изысканию эффективных средств и методов их иммунной защиты. В последние годы для ветеринарной практики готовят более 180 различных биопрепаратов (вакцин, сывороток, диагностикумов).

Становлению и дальнейшему развитию ветеринарной иммунологии в нашей стране способствовали труды виднейших ученых Н. Н. Гинсбурга, С. Н. Вышелеского, А. А. Владимирова, С. Г. Колесова, Я. Е. Колякова, Я. Р. Коваленко, И. И. Кулеско, Н. В. Лихачева, С. Я. Любашенко, Н. А. Михина, С. А. Муромцева, А. X. Саркисова, П. С. Соломкина и многих других. Перед ветеринарной иммунологией поставлены большие задачи по созданию новых и совершенствованию имеющихся вакцин, сывороток и да гностик умов, по изучению и профилактике иммунных болезней, по расширению исследований в области неинфекционной иммунологии (возрастная иммунология, иммунология размножения, неспецифические механизмы резистентности).

На животных было разработано несколько важных моделей (in vivo), обладающих экспериментальной ценностью и клинической пользой и сопоставимых с системами in vitro, упоминавшимися ранее. В качестве моделей использовали инбредные линии мышей с разными генетическими профилями; некоторые из них были получены методами генной инженерии. У животных некоторых инбредных линий отмечается врожденная предрасположенность к развитию определенных заболеваний (например, рак молочных желез, лейкоз, аутоиммунные заболевания, тяжелый комбинированный иммунодефицит).

Кроме того, выведены животные с генетическими нарушениями, способные экспрессировать некоторые клонированные чужеродные гены (так называемые трансгенные мыши), или животные, у которых заданные гены не экспрессируются (мыши с «нокаутными» генами). Такие линии используют для изучения последствий экспрессии определенных трансгенов или последствий отсутствия экспрессии гена у «нокаутных» мышей. Начнем обсуждение с животных инбредных линий.

Инбредные линии

Множество классических экспериментов в области иммунологии были проведены с использованием животных инбредных линий, таких как мыши, крысы и морские свинки. К образованию инбредной линии обычно приводит селективное близкородственное скрещивание потомства на протяжении более чем 20 поколений. Все члены инбредной линии животных генетически идентичны. Поэтому их называют син генными, как и идентичных близнецов Иммунный ответ инбредной линии можно изучать без учета вариабельности, связанной с генетическими различиями между животными.

Трансплантация органов между членами инбредной линии всегда успешна, поскольку их антигены главного комплекса гистосовместимости (МНС) идентичны. Действительно, знание законов трансплантации и того факта, что МНС является основным генетическим барьером для трансплантации, пришло в результате экспериментов на инбредных линиях.

Эксперименты с использованием инбредных линий привели к идентификации генов МНС I и II классов, основной функцией которых является доставка пептидных фрагментов антигена на поверхность клетки, что позволяет эпитопам быть распознанными антигенспецифичными Т-лимфоцитами.

Адоптивный перенос и пассивная иммунизация

Защита от многих болезней осуществляется клеточно-опосредованным иммунитетом, обеспечиваемым антигенспецифичными Т-клетками, в отличие от опосредованного антителами (гуморального) иммунитета. Различие между этими двумя ветвями иммунной системы хорошо демонстрируется адоптивным (заимствованным) переносом Т-клеток или пассивным введением антивосыворотки или очищенных антител.

Адоптивный перенос Т-клеток обычно проводится в генетически идентичных парах донор - реципиент (например, внутри инбредной линии) и в результате приводит к формированию долгосрочного адоптивного иммунитета после первого контакта с антигеном. Напротив, пассивный перенос сыворотки, которая содержит антитела, может быть осуществлен без учета барьеров МНС и остается эффективным лишь в течение того времени, пока перенесенные антитела сохраняют активность у реципиента. Вот почему этот тип переноса называется пассивной иммунизацией.

Мыши с тяжелым комбинированным иммунодефицитом

Тяжелый комбинированный иммунодефицит (ТКИД) является расстройством, при котором нарушается созревание В- и Т-клеток, что приводит к формированию у индивидуума недостаточности механизмов лимфоцитарной защиты. В 1980 г. была выведена инбредная линия мышей, у которых спонтанно развилась аутосомно-рецессивная мутация, приводяшая к ТКИД. Вследствие отсутствия функционирующих Т- и В-клеток у ТКИД-мышей приживлялись клеточные и тканевые трансплантаты от мышей других линий или видов. Таким ТКИД-мышам могут быть введены человеческие гемопоэтические стволовые клетки для создания ТКИД-человеческих химер.

У таких химерных мышей развиваются зрелые функциональные Т- и В-клетки, которые являются потомками введенных человеческих гемопоэтических стволовых клеток-предшественников. Эта модель на животных стала ценным исследовательским инструментом, поскольку позволяет иммунологам манипулировать человеческой иммунной системой in vivo и исследовать развитие разных лимфоидных клеток. Более того, ТКИД-человеческих мышей можно использовать для тестирования создаваемых вакцин, включая и те из них, которые помогут защитить людей от ВИЧ-инфекции.

Тимэктомированные и бестимусные мыши

Значение тимуса в развитии зрелых Т-клеток можно продемонстрировать на мышах, которые в период новорожденности перенесли тимэктомию, облучение, а затем пересадку сингенного костного мозга. У таких мышей не развиваются зрелые Т-лимфоциты. Также у мышей, гомозиготных по рецессивной мутации пи/пи, не развиваются зрелые Т-клетки, потому что мутация приводит к фенотипу, характеризующемуся отсутствием тимуса и волос (отсюда термин «nude» - голые). В обеих ситуациях развитие Т-клеток может быть восстановлено путем пересадки этим мышам эпителиальной ткани тимуса. Как и модели с ТКИД-мышами, эти животные модели полезны при изучении развития Т-лимфоцитов. Также они использовались для размножения in vivo линий опухолевых клеток и свежих опухолевых эксплантатов от животных других линий или вида, для чего необходимо отсутствие Т-клеток, призванных отторгать подобные чужеродные клетки.

Трансгенные мыши и манипуляции с генами

Трансгенные мыши

Еще одной важной моделью на животных, активно используемой в иммунологических исследованиях, являются трансгенные мыши. Их получают путем введения клонированного гена (трансгена) в оплодотворенную мышиную яйцеклетку. Затем яйцеклетки вводятся псевдобеременной мыши (рис. 5.14). Уровень успешности этой методики относительно невысок, трансген экспрессируют 10 - 30% потомства. Поскольку трансген внедряется как в соматические, так и в половые клетки, он передается потомству как менделевский признак.

Рис. 5.14. Общая методика получения трансгенных мышей

Конструируя трансген с заданным промотором, можно контролировать экспрессию генов. Например, некоторые промоторы работают только в определенных тканях (в частности, инсулиновый промотор работает только в поджелудочной железе). Другие промоторы начинают работать в ответ на биохимические сигналы, которые в некоторых случаях могут быть введены в качестве пищевой добавки (например, металлотиониновый промотор начинает работать в ответ на цинк, который можно добавлять в питьевую воду). Трансгенные мыши использовались для изучения генов, которые обычно не экспрессируются in vivo (например, онкогены).

Также с помощью трансгенов изучалось действие отдельных молекул иммуноглобулинов, Т-клеточных рецепторов, молекул МНС I и II классов и цитокинов. Были выведены трансгенные мыши, у которых весь мышиный иммуноглобулиновый локус был замещен генами иммуноглобулинов человека. Такая модель используется для выработки «человеческих» антител у мышей. Необходимо отметить, что недостатком трансгенного метода является то, что трансген встраивается в геном случайным образом. Это ограничение вместе с тем фактом, что экспрессия трансгена в большом количестве в разных тканях нефизиологична, обязывает исследователей очень тщательно интерпретировать результаты, полученные на трансгенных мышах.

Мыши с «нокаутными» генами

Иногда интересно определить, как удаление продукта конкретного гена повлияет на иммунную систему. Используя метод генных манипуляций, можно заместить нормальный ген мутировавшим или поврежденным, создав мышь с «нокаутным» («выбитым») геном. Таким образом, в отличие от метода, использующегося для создания трансгенных мышей, при данном методе «нокаутные» мыши экспрессируют трансгены, встраиваемые в собственные специфические гены, с помощью процесса, названного гомологичной рекомбинацией.

Гипотетически любой ген, для которого существует мутировавший или поврежденный трансген, может быть замещен таким путем. Были выведены «нокаутные» мыши, у которых отсутствует экспрессия различных важных генов, в том числе и тех, что кодируют некоторые цитокины и молекулы МНС. «Нокаутные» мыши использовались для идентификации участков гена, необходимых для его нормального функционирования. Для этого путем трансгенеза обратно в геном внедряли различные мутантные генные копии, что приводило (или не приводило) к восстановлению функционирования гена.

Анализ экспрессии генов

Микромассивы в исследовании экспрессии генов

Микромассивы, или генные чипы, являются мощными инструментами исследования уровня экспрессии тысяч генов одновременно. Микромассив состоит из тысяч фрагментов ДНК (у каждого из которых уникальная последовательность), прикрепленных в определенном порядке к стеклу или другой поверхности. Эти фрагменты ДНК в форме комплементарной ДНК (кДНК; приблизительно 500 - 5000 пар оснований) или олигонуклеотидов (20 - 80 пар оснований) могут представлять гены из всех частей генома. При этом можно приготовить специализированные микромассивы, которые будут использовать только ДНК исследуемых генов. В исследовании используется образец общей информационной РНК (иРНК) - продукт, получаемый в результате транскрипции всех активных генов.

Для проведения исследования с микромассивом образец общей иРНК от клетки или ткани обычно тестируется параллельно с контрольным образцом, необходимым для сравнения экспрессии генов. Например, могут сравниваться разные типы клеток или тканей, клетки на разных стадиях дифференцировки или опухолевые клетки со своими нормальными аналогами. Образцы, которые добавляются к микромассиву, обычно не являются иРНК; на матрице общей (тотальной) иРНК проводят обратную транскрипцию, а образовавшуюся кДНК затем помечают флуоресцентным материалом (флуорохромом). Флуорохромы разной окраски используют для маркировки кДНК из различных источников.

На рис. 5.15 показано, как микромассивы используются для сравнения экспрессии генов в популяции опухолевых лимфоидных клеток и нормальных лимфоцитов. Красный флуорохром был использован в качестве метки экспериментальных кДНК из опухолевых клеток, а зеленый - для кДНК, приготовленных из контрольных нормальных аналогов. Меченые кДНК наносили на чип и оставляли для гибридизации пар оснований с соответствующими фрагментами. К микромассиву добавляли кДНК как контрольного образца, так и экспериментального, поэтому они конкурировали за связывание на поверхности микромассива.

Рис. 5.15. Исследование с микромассивами, сравнивающее образцы иРНК опухолевых и нормальных лимфоцитов

Материал, не образовавший гибридов, смывали, оставляя участки флуоресценции там, где произошло совпадение. По окончании гибридизации микромассив сканировали лазером для обнаружения красных, зеленых или желтых пятен. Наибольшие уровни каждого типа кДНК отражал свой цвет: красный - кДНК экспериментальных опухолевых клеток; зеленый - контрольные кДНК; желтый - одинаковые уровни ДНК обоих образцов. Для интерпретации результатов флуоресцентный сканер определял точный уровень флуоресценции каждого пятна на стекле.

Полученные данные затем анализировала компьютерная программа, которая сравнивала информацию о флуоресценции с генетической базой данных для определения того, какие гены избыточно или недостаточно экспрессируются в тестированных образцах. Характеристика распределения и количества связывания ДНК с микромассивом потенциально может быть полезной в области иммунологии. В частности, для клинической диагностики лимфоидных опухолей , разработки препаратов (например, тестирование разрабатываемых иммуносупрессивных препаратов по их действию на экспрессию цитокиновых генов) и открытия новых генов.

Выводы

1. При взаимодействии антитела и антигена кова-лентные связи не используются; задействованы слабые силы, такие как электростатические, гидрофобные и ван-дер-ваальсовы. Следовательно, для достаточного взаимодействия связывающий участок антитела и антиген должны строго пространственно соответствовать друг другу, как ключ с замком.

2. Только реакция между поливалентным антигеном и по меньшей мере двухвалентным антителом может привести к взаимодействию, выраженному перекрестным связыванием молекул антигена антителами. Эти реакции невозможны при участии гаптенов или моновалентных Fab-фрагментов.

3. Взаимодействие между растворимым антителом и нерастворимым корпускулярным антигеном приводит к агглютинации. Степень агглютинации зависит от соотношения взаимодействующих антител и антигена. При большой концентрации антител агглютинация может не развиться. Это явление называется прозоной. Под термином «титр» понимают наибольшее разведение сыворотки, при котором еще происходит агглютинация, после чего при более высоком разведении она не начинается.

4. Реакция преципитации происходит при смешивании в правильном соотношении растворимого поливалентного антигена и (по меньшей мере) двухвалентных антител. Она может протекать в водной среде или геле.

5. Реакции в геле между растворимыми антигенами и антителами могут быть использованы для качественного и количественного анализа антител или антигенов. Примерами таких реакций могут стать диффузия в геле, радиальная диффузия и иммуноэлектрофорез.

6. Радиоиммунное исследование является высокочувствительным тестом для количественного определения антигенов или антител. В нем используются радиоактивно меченные антигены или антитела, а основой метода является конкурентное связывание немеченого и меченого антигенов. Необходимо отделить антиген, связанный с антителами, от несвязанного меченого антигена. Обычно разделение достигается использованием преципитации с антииммуноглобулинами.

7. Иммунное исследование на твердой фазе является методикой, которая основана на способности многих белков прикрепляться к пластику с образованием мономолекулярного слоя. Антиген наносится на ячейки планшета, добавляются антитела, затем ячейки отмываются и измеряется наличие и количество связанных антител, для чего используют антииммуноглобулины с радиоактивной или ферментной меткой.

8. Ферментный иммуносорбентный анализ является разновидностью твердофазного иммунного исследования, в котором ферменты прикреплены к антииммуноглобулинам. Количество определяется путем колориметрической оценки после добавления субстрата, который меняет цвет под действием фермента.

9. Иммунофлуоресценция - это метод, при котором антиген обнаруживают, используя иммуноглобулины, меченные флуоресцином. При прямой иммунофлуоресценции антитела к искомому антигену несут флуоресцентную метку. При непрямой иммунофлуоресценции антигенспецифичные антитела не маркированы, их определяют после добавления флуоресцентно меченных антииммуноглобулинов. Проточные флуоресцентные клеточные сортеры являются приборами, которые можно использовать для подсчета и сортировки флуоресцентно меченных клеток.

10. В исследованиях, используемых для оценки функции лимфоцитов, обычно измеряют клеточный пролиферативный ответ или эффекторные функции. Например, можно исследовать функциональное состояние В-клеток путем измерения их способности к пролиферации и продукции антител в ответ на В-клеточные митогены, такие как ЛПС или митоген лаконоса. Т-клетки обычно исследуют по их способности усиливать функции других клеток (в случае СD4+-кле-ток) или по способности уничтожать мишени, имеющие специфичные антигены (в случае СD8+-клеток). Кроме того, Т-клетки можно исследовать, измеряя их способность к пролиферации или продукции некоторых цитокинов в ответ на действие Т-клеточных митогенов, таких как ФГА и Кон А.

11. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными реагентами, состоящими из гомогенной популяции антител, идентичных по специфичности к определенному эпитопу.

Р.Койко, Д.Саншайн, Э.Бенджамини

Ветеринарная иммунология
Книга представляет собой первую в мировой литературе попытку сочетать теоретические поло жения иммунологии с их практическим использо ванием в ветеринарной практике В ней изложены теоретические представления о врожденном и приобретенном иммунитете, рассмотрены иммунологические реакции, используемые для диагностики заболевании, описаны вакцины и сыворотки, применяемые для профилактики и лечения болезней, освещена роль иммунитета при нормальном физиологическом состоянии организма и различных патологических изменениях

Книга предназначена для научных и практических работников в области ветеринарной и медицинской иммунологии.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Предисловие к русскому изданию 3
Предисловие к английскому изданию 4
Часть I
ОСНОВНЫЕ АСПЕКТЫ ИММУНОЛОГИИ
Глава 1. История возникновения иммунологии 5
Глава 2. Иммунитет и взаимоотношения животного с другими организмами
окружающей среды 10
Глава 3. Неспецифические механизмы иммунитета 13
Глава 4. Специфический приобретенный иммунитет 21
Глава 5. Антигены 25
Глава 6. Антитела 31
Глава 7. Особенности реакции антиген - антитело 52
Глава 8. Гиперчувствительность при реакции антиген - антитело 63
Глава 9. Реакции клеточного иммунитета 71
Глава 10. Образование антител и начало иммунного ответа 74
Часть II
МЕТОДЫ ИНДИКАЦИИ ИММУННОГО СОСТОЯНИЯ и ПРИМЕНЕНИЯ ИХ В ДИАГНОСТИКЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
Глава 11. Определение иммунитета животных методами in vivo 94
Глава 12. Методы определения н измерения содержания антител 102
Глава 13. Реакция нейтрализации 111
Глава 14. Реакция агглютинации 114
Глава 15. Реакция преципитации 125
Глава 16. Реакции с использованием меченых реагентов J35
Глава 17. Связывание комплемента и другие родственные реакции 145
Глава 18. Реакции in vitro для изучения гиперчувствительности, обусловленной антителами 156
Глава 19. Характеристика клеточного иммунитета в реакциях in vitro 158
Часть III
ВАКЦИНЫ И АНТИСЫВОРОТКИ
Глава 20. Активный иммунитет 162
Глава 21. Типы вакцин 171
Глава 22. Вакцины против вирусных заболеваний 175
Глава 23. Вакцины против заболеваний, вызываемых риккеттсиями, микоплазмами и бактериями 184
Глава 24. Вакцины для защиты от заболеваний, вызываемых простейшими
и многоклеточными организмами 189
Глава 25. Применение вакцин 191
Глава 26. Пассивный иммунитет и терапевтическая антисыворотка 217
Часть IV
ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ И ПАТОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ
Глава 27. Сохранение клеточной интеграции организма 231
Глава 28. Физиология иммунитета 240
Глава 29. Патогенные эффекты иммунологических реакций 250
Глава 30. Использование специфических иммунных реакций для борьбы
с инфекционными заболеваниями 271
Приложение. Терминология 282
Послесловие 296
Предметный указатель 303

ВЕТЕРИНАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ И ИММУНОЛОГИЯ

для специальности 310800 - «Ветеринария» по квалификации специалиста - ветеринарный врач

Москва 2001

1. Цели и задачи дисциплины "ветеринарная микробиология и иммунология"

Основная цель преподавания дисциплины «Ветеринарная микро­биология и иммунология» - формирование у будущего ветеринарного врача научного мировоззрения о многообразии микроорганизмов, об их роли в общебиологических процессах, в т.ч. при инфекциях, и в па­тологии животных, освоение теоретических основ диагностики инфек­ционных болезней, принципов иммунологических исследований, изго­товления и контроля биопрепаратов.

В задачи курса входит изучение студентами принципов: системати­ки, морфологии и физиологии, широты_ распространения микроорга­низмов в природе особенностей их биологии и экологии; роль микро­бов в превращении веществ в природе и эффекты действия факторов внешней среды на прокариотические клетки, овладение основами уче­ния об инфекции и иммунитете, о наследственности и об изменчиво­сти, освоение методов индикации и идентификации патогенных для животных бактерий и грибов, бактериологических серологических, генетических и аллергических исследований, используемых при диаг­ностике инфекционных болезней.

В результате изучения курса студенты должны знать теоретиче­ские основы жизнедеятельности микроорганизмов, их взаимодействия друг с другом и с организмом животных, основные биологические свойства патогенных микробов, принципы и способы диагностики и специфической профилактики инфекционных болезней. Этим целям и задачам способствует учебно-исследовательская работа студентов СУИРС.

Полученные знания по биологии и экологии возбудителей инфек­ционных болезней, инфекции и иммунитету должны помочь будущим ветеринарным специалистам правильно организовывать и проводить бактериологические и серологические исследования, специфическую профилактику заразных заболеваний. Для изучения курса «Ветеринар­ная микробиология и иммунология» студентам необходимо Тфедвари-тельно усвоить разделы следующих дисциплин:

физики (реактивное движение у живых организмов, центрифу­ги и их применение в биологических исследованиях, клеточные мем-

браны, разрешающая способность оптических приборов, люминес­центный анализ, фотобиологические реакции, рентгеновское излуче­ние, электронный микроскоп);

органической химии (углеводороды, спирты, фенолы, углево­ды, аминокислоты и белки);

неорганической и аналитической химии (дисперсные системы и растворы, приготовление разведений с коэффициентами 2 и 10);

физической и коллоидной химии (учение о растворах, меха­ низм фотосинтеза, устойчивость коллоидных систем и коагуляция, суспензии, эмульсии и пены, белки);

анатомии сельскохозяйственных животных (органы крово- и лимфообразования);

биохимии (ферменты, белки, биологическое окисление и эле­менты биоэнергетики, строение и свойства углеводов, классификация, строение и основные свойства липидов, строение и синтез аминокис­лот и нуклеопротеидов, биологическое значение витаминов, водный обмен и обмен минеральных веществ);

Физиология, патофизиология (транспорт питательных веществ, механизмы секреции, общебиологические термины, механизм воспа­ ления, аллергии, действия лизоцима, комплемента, органы и клетки иммунной системы).

Естественно, для более успешного освоения курсов микробиологии и иммунологии необходимо знание латинского языка.

Усвоение студентами дисциплины преподаватели проверяют на ла­бораторных занятиях, коллоквиумах (устно или по программе ЭВМ), на письменных контрольных и курсовых работах, зачётах, а по оконча­нии курсов - экзаменах.

Объединенный иммунологический форум, Санкт-Петербург 2008

ВЕТЕРИНАРНАЯ ИММУНОЛОГИЯ

Результаты применения препарата «Гемобаланс» при коррекции иммунодефицитных состояний у лошадей

А.Б. Андреева

Целью наших исследований было изучение изменений иммунологических характеристик крови жеребых кобыл (вторая половина жеребости) и коррекции данных показателей применением препарата «Гемобаланс». Взятие крови проводили до применения препарата (фоновые значения) и после применения препарата «Гемобаланс». Препарат вводили внутримышечно по следующей схеме: 1 мл на 45 кг массы, каждые 48 часов в течении 7 дней (3 инъекции). Исследования проводили на 10 кобылах в возрасте от 5 до 12 лет, содержащихся в условиях частных конюшен в Ленинградской области. Из данных исследований следует, что во второй половине жеребости наблюдается снижение активности факторов как специфической, так и неспецифической резистентности организма матери, на что указывают низкие значения концентраций иммуноглобулинов, как факторов специфического иммунитета, и снижение активности неспецифического звена иммунитета. При применении комплексного препарата «Гемобаланс» отмечаются следующая динамика изменений данных показателей: концентрация 1д А увеличилась на 12,71%, 1д М на 31,57%, 1д ^ на 31,57%, 1д С2 на 45,5%, БАСК на 23, 19%, Лизоцимная активность на 13,12%, Фагоцитарный индекс на 43,75%, Фагоцитарное число на 50, 16 %, Фагоцитарный индекс на 48, 12 %.Таким образом, на основании проведенных исследований можно сделать следующие выводы:1.Вторая половина жеребости сопровождается снижением факторов неспецифической и специфической резистентности. 2. Применение в данный период кобылам комплексного препарата «Гемобаланс» способствует стимулированию неспецифической и специфической резистентности.

Влияние применения препарата «Хелавит» на показатели естественной резистентности собак

А.А. Бахта

ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Лизоцимная и бактерицидные активности сыворотки крови являются важными показателями естественно резистентности собак. Целью наших исследований было изучение влияния применения препарата «Хелавит» на БАСК, лизоцимную активность и активность фагоцитоза у собак при вторичных иммунодефицитах. Исследования проводили на собаках со вторичными иммунодефицитами до применения препарата «Хелавит» и после курса приема данного препарата. До приема препарата БАСК составляла 66,7± 2,5, после применения увеличилась на 14,5%, активность лизоцима увеличилась на 16,65% (исходные данные 13±1,55 оп.ед.), фагоцитарная активность до опыта составляла 45,45±6,89,фагоцитарный индекс 5,0±1,2, фагоцитарное

число 11 ±2,5, после приема препарата данные показатели увеличились соответственно на 23,5%; 20,0%, 25,5%. Таким образом, данный препарат обладает иммуномодулирующим действием и может быть рекомендован при коррекции иммунодефицитных состояний у собак.

Иммунологическая диагностика дирофиляриоза собак

Т.В. Богданова, В.И. Бойко

ГОУ ВПО «Астраханский государственный университет», Астрахань, Россия

Иммуномодулирующее действие препарата Римолан у коров с субклиническим маститом

В. Антане1, Е. Быкова2, Л. Емельянов1, И. Лусис1 ветеринарный факультет Латвийского Сельскохозяйственного университета;

2Рижский Центр Репродукции, Латвия

В структуре заболеваемости коров маститы занимают особое место и по сообщениям Европейской ассоциации животноводов данная патология во всех странах с развитым скотоводством имеет тенденцию к ее увеличению. Наибольшую опасность при этом представляют субклинические формы мастита, составляющие 95% всех случаев воспаления вымени. Они по данным иследователей наносят большой урон хозяйствам, уменьшают годовой надой по стаду от 10% до 40%. В связи с этим клиницисты активно изучают состояние общей резистентности животных, сопротивляемость поврежденного вымени к патогенному возбудителю и разрабатывают этиопатогенетические схемы терапии с применением иммунотропных препаратов.У 15 коров с субкли-

ническим маститом изучено влияние препарата Римолан на клиническое состояние вымени; в сыворотке крови и молоке иследованы показатели врожденного иммунитета. Выявлено, что измененные показатели гранулоцитов, уровня IgG, IgA, IgM, в молоке; индекс фагоцитарной активности нейтрофилов, концентрация IgG, IgA, IgM, лейкоцитов и лимфоцитов в крови подтверждают иммуномодулирующее действие препарата Римолан при данной патологии.

Перспективы клинического применения препарата Римолан

Я.Я. Ветра2, Е.Я. Быкова1, Л.В. Иванова2, И.А. Барене2,

Л.Я. Штале2, Л.Р. Хемий1, Н.С. Сергеева4, И.К. Свиридова4,

Л.М. Скуинь3, И.Я. Даберте2, Л.Ю. Карпенко5, В.В. Богомолов6,

М.В. Афендик1, Т.С. Ясюк1

1Рижский центр Репродукции;

2Университет Страдыня, Рига;

3Российская Медицинская Академия постдипломного

образования, Москва;

4МНИОИ им. П. А. Герцена;

5ФГОУ ВПО С.-П. ГАВМ,

Ленинградская МО Ветлаборатория

В Латвии разработан препарат (РИМОЛАН) из клеток плаценты человека (форма лиофилизированная). В процессе разработки технологии авторами созданы режимы, позволяющие наиболее полно сохранить комплекс биологически активных веществ с обоснованными в эксперименте in vivo иммунокомпетентными свойствами. Сохранение комплексного природного состава при производстве подобных лекарственных форм расширяет спектр применения данных препаратов при антибактериальной, антивирусной терапии, при онко- и другой патологии. Изучение состава Римолана выявило в нем наличие широкого спектра цитокинов, аминокислот, гормонов, антиоксидан-тов. В доклинических и клинических исследованиях в практике ветеринарных врачей доказаны иммунотропное действие препарата, противоопухолевая активность с достоверным улучшением качества жизни пациентов, антивирусная и антибактериальная активность.

Применение Ронколейкина при вирусных респираторных болезнях телят

Е.А. Гречухин

Одной из актуальнейших и важнейших проблем в современном молочном животноводстве являются респираторные болезни крупного рогатого скота вирусной этиологии, такие как: инфекционный ринотрахеит (ИРТ), параг-рипп-3 (ПГ-3), вирусная диарея (ВД), респираторно-синцитиальная инфекция (РС). Перед нами была поставлена задача определить особенности эпизоотологии и проанализировать существующие методы лечебно-профилактических мероприятий. Мы опробовали меры борьбы на конкретно взятом племенном хозяйстве «Рапти» Лужского района Ленинградской области. Применяли вакцину против ИРТ и ПГ-3 производства ВНИИЗЖ с двухкратной вакцинацией стельных коров в период сухостоя, и двухкратной вакцинацией телят с 15 дневного возраста. Наряду с этим при рождении теленку вводили восьмивалентную сыворотку согласно наставлению, и препарат Ронколейкин (интерлейкин 2) в дозе 100 000 Ед внутримышечно на голову при рождении. В контрольной группе падеж составил 13,7% и сохранность 79,5%, а в опытной группе падеж составил 3,9% и 96,2% соответственно. В результате применения препарата Ронколейкин падеж от респираторных инфекций вирусной этиологии сократился на 9,8% и сохранность соответственно возросла на 16,7%, что доказывает эффективность применения препарата.

Влияние препарата Хелавит на показатели неспецифической защиты организма крупного рогатого скота

А.И. Енукашвили

Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины, Санкт-Петербург, Россия

Микроэлементный препарат Хелавит в своем составе содержит такие жизненно необходимые элементы как Ре, Мп, Си, 7п, Со, 5е, и \ в виде комплекса с органическим производным янтарной кислоты. Отличие данного препарата - это доступная для организма форма в виде комплекса с биолигандами (хелатными соединениями), которые сходны с транспортными белками организма, что и обеспечивает высокую усвояемость микро- и макроэлементов. Синтетические хелатокомплексные соединения, благодаря их активному участию в обменных процессах, оказывают положительное действие на резистентность, продуктивную и воспроизводительную функцию животных. Целью исследований было изучение влияния препарата Хелавит на неспецифическую защиту организма крупного рогатого скота. Было установлено, что данный препарат в профилактических дозах 0,6 мл на 10 кг живой массы в течение 30 дней повышает показатели фагоцитоза и лизоцимную активность сыворотки крови коров. ФА лейкоцитов у животных контрольной группы составила 39,3 ± 2,16%, а у подопытных животных - 48,7 ± 2,27; ФИ у контрольных животных составил 6,3 ± 0,29, у подопытных - 6,7 ± 0,11. Лизоцимная активност